本(běn)試劑盒只能用(yòng)於(yú)科(kē)學研(yán)究，不(bù)得用(yòng)於(yú)醫學診斷

人（Human）白三烯B4（LTB4）ELISA檢測試劑盒

使(shǐ)用(yòng)說(shuō)明(míng)書

檢測原理

試劑盒採用(yòng)雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 。往預(yù)先包被白三烯B4（LTB4）抗體的包被微孔中，依次加入標本(běn) 、標準品 、HRP標記的檢測抗體，經過溫育並che底洗(xǐ)滌 。用(yòng)底物TMB顯(xiǎn)色 ，TMB在過氧(yǎng)化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色 ，並在酸的作用(yòng)下轉(zhuǎn)化成最終的黃色 。顏色的深淺和(hé)樣品中的白三烯B4（LTB4）呈正相關。用(yòng)酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣品收(shōu)集 、處理及(jí)保存方法

1.  血清(qīng)：使(shǐ)用(yòng)不(bù)含熱(rè)原和(hé)內毒(dú)素的試管 ，操作過程中避免任何(hé)細胞刺激 ，收(shōu)集血液後，3000轉(zhuǎn)離(lí)心10分(fèn)鐘將血清(qīng)和(hé)紅細胞迅速小(xiǎo)心地分(fèn)離(lí)。

2.  血漿 ：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝 。3000轉(zhuǎn)離(lí)心30分(fèn)鐘取上清(qīng)。

3.  細胞上清(qīng)液 ：3000轉(zhuǎn)離(lí)心10分(fèn)鐘去除顆粒和(hé)聚合物。

4.  組織勻漿 ：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離(lí)心10分(fèn)鐘取上清(qīng) 。

5.  保存：如果樣本(běn)收(shōu)集後不(bù)及(jí)時(shí)檢測，請按一次用(yòng)量分(fèn)裝，凍存於(yú)-20℃，避免反復(fù)凍融，在室(shì)溫下解凍並確保樣品均勻地充分(fèn)解凍 。

自(zì)備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精(jīng)度加樣器及(jí)槍頭 ：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恆(héng)溫箱(xiāng)

操作注意事項(xiàng)

1.  試劑盒保存在2-8℃，使(shǐ)用(yòng)前(qián)室(shì)溫平衡20分(fèn)鐘 。從冰箱(xiāng)取出(chū)的濃縮洗(xǐ)滌液會(huì)有結晶，這(zhè)屬於(yú)正常現象 ，水浴加熱(rè)使(shǐ)結晶wan全(chéng)溶解後再使(shǐ)用(yòng)。

2.  實驗中不(bù)用(yòng)的板條應立即放回自(zì)封袋中 ，密封（低溫乾燥）保存 。

3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性(xìng)對照或者(zhě)空白；按照說(shuō)明(míng)書操作時(shí)樣本(běn)已經稀釋5倍 ，最終結果乘以5才是樣本(běn)實際濃度 。

4.  嚴格按照說(shuō)明(míng)書中標明(míng)的時(shí)間 、加液量及(jí)順序(xù)進行溫育操作。

5.  所有液體組分(fèn)使(shǐ)用(yòng)前(qián)充分(fèn)搖勻。

試劑盒組成

注 ：標準品（S0-S5）濃度依次為 ：0 、15 、30 、60 、120 、240 pg/mL

試劑的準備

 20×洗(xǐ)滌緩衝液的稀釋 ：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗(xǐ)滌緩衝液加19份的蒸餾水。

洗(xǐ)板方法

1.  手(shǒu)工(gōng)洗(xǐ)板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗(xǐ)滌液 ，靜(jìng)置1min後甩盡孔內液體 ，在吸水紙上拍乾，如此洗(xǐ)板5次。

2.  自(zì)動洗(xǐ)板機：每孔注入洗(xǐ)液350μL，浸泡1min ，洗(xǐ)板5次 。

操作步驟

1.  從室(shì)溫平衡20min後的鋁箔袋中取出(chū)所需板條 ，剩餘板條用(yòng)自(zì)封袋密封放回4℃ 。

2.  設(shè)置標準品孔和(hé)樣本(běn)孔 ，標準品孔各(gè)加不(bù)同濃度的標準品50μL ；

3.  樣本(běn)孔先加待測樣本(běn)10μL ，再加樣本(běn)稀釋液40μL；空白孔不(bù)加。

4.  除空白孔外 ，標準品孔和(hé)樣本(běn)孔中每孔加入辣根過氧(yǎng)化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用(yòng)封板膜封住反應孔 ，37℃水浴鍋或恆(héng)溫箱(xiāng)溫育60min。

5.  棄去液體 ，吸水紙上拍乾 ，每孔加滿洗(xǐ)滌液，靜(jìng)置1min ，甩去洗(xǐ)滌液 ，吸水紙上拍乾 ，如此重復(fù)洗(xǐ)板5次（也(yě)可用(yòng)洗(xǐ)板機洗(xǐ)板）。

6.  每孔加入底物A、B各(gè)50μL，37℃避光孵育15min 。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各(gè)孔的OD值。

結果判斷

 繪制標準曲線 ：在Excel工(gōng)作表(biǎo)中，以標準品濃度作橫坐標 ，對應OD值作縱坐標，繪制出(chū)標準品線性(xìng)回歸曲線，按曲線方程計算各(gè)樣本(běn)濃度值 。

試劑盒性(xìng)能

1.  準確性(xìng) ：標準品線性(xìng)回歸與預(yù)期濃度相關係(xì)數R值，大於(yú)等(děng)於(yú)0.9900 。

2.  靈敏度：zui低檢測濃度小(xiǎo)於(yú)1.0 pg/mL。

3.  特(tè)異性(xìng) ：不(bù)與其它可溶性(xìng)結構類似物交叉反應。

4.  重復(fù)性(xìng)：板內 、板間變異系(xì)數均小(xiǎo)於(yú)15% 。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效(xiào)期：6個月(yuè)

免責聲(shēng)明(míng)

1.   試劑盒僅供研(yán)究使(shǐ)用(yòng) ，不(bù)得用(yòng)於(yú)臨床實驗或人體實驗 ，否則(zé)所產生的一切後果 ，由實驗者(zhě)承擔，本(běn)公司概不(bù)負責 。

2.   嚴格按照說(shuō)明(míng)書操作，實驗者(zhě)違反說(shuō)明(míng)書操作 ，後果由實驗者(zhě)承擔。