本試劑盒只能用於科學研究，不(bù)得用於醫學診斷

小鼠(shǔ)（Mouse）甲狀腺刺激抗體（TSAB）

ELISA檢測試劑盒

使用說明(míng)書

檢測原理

試劑盒採用雙抗一(yī)步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往(wǎng)預先包被抗原的包被微孔中 ，依次加入標(biāo)本、標(biāo)准品 、HRP標(biāo)記的檢測抗原，經過溫育(yù)並(bìng)chè底洗滌。用底物TMB顯色 ，TMB在過氧化物酶的催(cuī)化下轉化成藍色，並(bìng)在酸(suān)的作用下轉化成最終的黃色 。顏色的深淺和樣品中的甲狀腺刺激抗體（TSAB）呈正相關 。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度 。

樣品收集(jí)、處理及保存方(fāng)法

1.  血(xuè)清(qīng) ：使用不(bù)含熱原和內毒素的試管，操作過程(chéng)中避免任何細(xì)胞刺激，收集(jí)血(xuè)液後(hòu) ，3000轉離(lí)心10分鐘(zhōng)將血(xuè)清(qīng)和紅細(xì)胞迅速小心地分離(lí) 。

2.  血(xuè)漿：EDTA、檸檬酸(suān)鹽或肝素抗凝。3000轉離(lí)心30分鐘(zhōng)取上(shàng)清(qīng)。

3.  細(xì)胞上(shàng)清(qīng)液：3000轉離(lí)心10分鐘(zhōng)去除(chú)顆粒和聚合物 。

4.  組織勻(yún)漿：將組織加入適量生理鹽水(shuǐ)搗碎(suì)。3000轉離(lí)心10分鐘(zhōng)取上(shàng)清(qīng)。

5.  保存：如果樣本收集(jí)後(hòu)不(bù)及時(shí)檢測，請按一(yī)次用量分裝(zhuāng)，凍存於-20℃ ，避免反復凍融 ，在室溫下解凍並(bìng)確(què)保樣品均勻(yún)地充分解凍。

自(zì)備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高(gāo)精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL 、200-1000uL

3. 37℃恆溫箱

操作注意事項

1. 試劑盒保存在2-8℃ ，使用前室溫平衡20分鐘(zhōng)。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬於正常現象 ，水(shuǐ)浴加熱使結晶wán全溶解後(hòu)再使用 。

2. 實驗中不(bù)用的板條應(yīng)立即放(fàng)回自(zì)封袋中，密封（低溫乾燥）保存
。

3. 濃度為0的S0號標(biāo)准品即可視為陰(yīn)性對(duì)照或者空白；按照說明(míng)書操作時(shí)樣本已經稀釋5倍，最終結果乘以(yǐ)5才是樣本實際濃度 。

4.  嚴格按照說明(míng)書中標(biāo)明(míng)的時(shí)間、加液量及順序(xù)進行溫育(yù)操作 。

5. 所(suǒ)有液體組分使用前充分搖勻(yún)。

試劑盒組成

注 ：標(biāo)准品（S0-S5）濃度依次為 ：0、0.25、0.5、1、2、4 ng/L

試劑的準備

20×洗滌緩衝液的稀釋：蒸餾水(shuǐ)按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水(shuǐ) 。

洗板方(fāng)法

1. 手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿(mǎn)洗滌液 ，靜置1min後(hòu)甩盡孔內液體 ，在吸水(shuǐ)紙上(shàng)拍乾 ，如此洗板5次 。

2. 自(zì)動洗板機(jī) ：每孔注入洗液350μL，浸泡1min ，洗板5次 。

操作步驟

1. 從室溫平衡20min後(hòu)的鋁(lǚ)箔袋中取出所(suǒ)需板條 ，剩餘板條用自(zì)封袋密封放(fàng)回4℃。

2.  設置標(biāo)准品孔和樣本孔，標(biāo)准品孔各加不(bù)同濃度的標(biāo)准品50μL ；

3. 樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不(bù)加 。

4.  除(chú)空白孔外，標(biāo)准品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗原100μL ，用封板膜封住反應(yīng)孔 ，37℃水(shuǐ)浴鍋或恆溫箱溫育(yù)60min。

5. 棄去液體 ，吸水(shuǐ)紙上(shàng)拍乾 ，每孔加滿(mǎn)洗滌液 ，靜置1min，甩去洗滌液，吸水(shuǐ)紙上(shàng)拍乾，如此重復洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板） 。

6. 每孔加入底物A 、B各50μL ，37℃避光孵育(yù)15min。

7. 每孔加入終止液50μL ，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值 。

結果判斷

繪制標(biāo)准曲線 ：在Excel工作表中，以(yǐ)標(biāo)准品濃度作橫(héng)坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)准品線性回歸曲線，按曲線方(fāng)程(chéng)計算各樣本濃度值 。

試劑盒性能

1. 準確(què)性：標(biāo)准品線性回歸與預期濃度相關係數R值 ，大於等於0.9900。

2. 靈敏度：zuì低檢測濃度小於0.1 ng/L。

3. 特異性 ：不(bù)與其它可溶性結構類似物交叉反應(yīng) 。

4. 重復性：板內 、板間變異系數均小於15%。

5. 貯藏：2-8℃ ，避光防潮保存。

6. 有效(xiào)期：6個月

免責聲明(míng)

1. 試劑盒僅供研究使用
，不(bù)得用於臨床實驗或人體實驗，否則所(suǒ)產生的一(yī)切(qiè)後(hòu)果 ，由實驗者承(chéng)擔，本公司概不(bù)負責。

2. 嚴格按照說明(míng)書操作 ，實驗者違反說明(míng)書操作 ，後(hòu)果由實驗者承(chéng)擔 。