人(rén)白(bái)三烯(xī)B4（LTB4）ELISA試劑(jì)盒

品牌：佰利萊

規(guī)格：96t/48t

人(rén)白(bái)三烯(xī)B4（LTB4）ELISA試劑(jì)盒

本試劑(jì)盒只能用(yòng)於科學(xué)研(yán)究，不得用(yòng)於醫學(xué)診斷(duàn)

人(rén)（Human）白(bái)三烯(xī)B4（LTB4）ELISA檢測試劑(jì)盒

使用(yòng)說(shuō)明書

檢測原(yuán)理

試劑(jì)盒採(cǎi)用(yòng)雙(shuāng)抗體一步夾心法酶聯免疫吸(xī)附試驗（ELISA） 。往預(yù)先(xiān)包被白(bái)三烯(xī)B4（LTB4）抗體的包被微孔中 ，依次加(jiā)入標本、標準(zhǔn)品 、HRP標記的檢測抗體 ，經(jīng)過溫(wēn)育並che底(dǐ)洗滌。用(yòng)底(dǐ)物TMB顯(xiǎn)色，TMB在過氧(yǎng)化物酶的催化下轉化成藍色 ，並在酸的作用(yòng)下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白(bái)三烯(xī)B4（LTB4）呈正相關 。用(yòng)酶標儀(yí)在450nm 波長下測定吸(xī)光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣品收集(jí)、處理及保存方法

1.  血(xuè)清(qīng)：使用(yòng)不含熱原(yuán)和內毒素的試管 ，操(cāo)作過程(chéng)中避免任何細胞刺激(jī) ，收集(jí)血(xuè)液後，3000轉離(lí)心10分(fèn)鐘將血(xuè)清(qīng)和紅(hóng)細胞迅速小心地(dì)分(fèn)離(lí) 。

2.  血(xuè)漿：EDTA 、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離(lí)心30分(fèn)鐘取上清(qīng)。

3.  細胞上清(qīng)液：3000轉離(lí)心10分(fèn)鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻(yún)漿 ：將組織加(jiā)入適(shì)量(liàng)生理鹽水搗碎 。3000轉離(lí)心10分(fèn)鐘取上清(qīng) 。

5.  保存：如果樣本收集(jí)後不及時檢測 ，請按一次用(yòng)量(liàng)分(fèn)裝 ，凍存於-20℃ ，避免反復凍融，在室溫(wēn)下解(jiě)凍並確(què)保樣品均勻(yún)地(dì)充分(fèn)解(jiě)凍 。

自備物品

1. 酶標儀(yí)（450nm）

2. 高(gāo)精(jīng)度加(jiā)樣器(qì)及槍頭 ：0.5-10uL 、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恆溫(wēn)箱

操(cāo)作注(zhù)意事項

1.  試劑(jì)盒保存在2-8℃，使用(yòng)前室溫(wēn)平衡20分(fèn)鐘 。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶 ，這屬於正常現(xiàn)象，水浴加(jiā)熱使結晶wan全溶(róng)解(jiě)後再使用(yòng)。

2.  實(shí)驗中不用(yòng)的板條應(yīng)立(lì)即放回自封袋中，密封（低溫(wēn)乾(gàn)燥）保存。

3.  濃度為0的S0號標準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白(bái)；按照說(shuō)明書操(cāo)作時樣本已經(jīng)稀釋5倍 ，最終結果乘以5才(cái)是樣本實(shí)際濃度 。

4.  嚴格按照說(shuō)明書中標明的時間、加(jiā)液量(liàng)及順序進行(xíng)溫(wēn)育操(cāo)作 。

5.  所有液體組分(fèn)使用(yòng)前充分(fèn)搖勻(yún) 。

試劑(jì)盒組成

注(zhù) ：標準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0 、15、30 、60 、120 、240 pg/mL

試劑(jì)的准(zhǔn)備

 20×洗滌緩衝液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋 ，即1份的20×洗滌緩衝液加(jiā)19份的蒸餾水 。

洗板方法

1.  手工洗板 ：甩盡孔內液體 ，每孔加(jiā)滿洗滌液，靜置(zhì)1min後甩盡孔內液體 ，在吸(xī)水紙上拍乾(gàn) ，如此洗板5次。

2.  自動洗板機：每孔注(zhù)入洗液350μL，浸泡1min ，洗板5次。

操(cāo)作步驟

1.  從室溫(wēn)平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條，剩餘板條用(yòng)自封袋密封放回4℃。

2.  設置(zhì)標準(zhǔn)品孔和樣本孔，標準(zhǔn)品孔各加(jiā)不同濃度的標準(zhǔn)品50μL ；

3.  樣本孔先(xiān)加(jiā)待測樣本10μL ，再加(jiā)樣本稀釋液40μL ；空白(bái)孔不加(jiā)。

4.  除空白(bái)孔外 ，標準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加(jiā)入辣根過氧(yǎng)化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL ，用(yòng)封板膜封住反應(yīng)孔 ，37℃水浴鍋或恆溫(wēn)箱溫(wēn)育60min。

5.  棄去液體，吸(xī)水紙上拍乾(gàn) ，每孔加(jiā)滿洗滌液 ，靜置(zhì)1min，甩去洗滌液，吸(xī)水紙上拍乾(gàn) ，如此重復洗板5次（也可用(yòng)洗板機洗板）。

6.  每孔加(jiā)入底(dǐ)物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加(jiā)入終止(zhǐ)液50μL，15min內 ，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷(duàn)

 繪制標準(zhǔn)曲線(sī) ：在Excel工作表中，以標準(zhǔn)品濃度作橫坐標，對應(yīng)OD值作縱坐標，繪制出標準(zhǔn)品線(sī)性回歸曲線(sī) ，按曲線(sī)方程(chéng)計算各樣本濃度值。 

試劑(jì)盒性能

1.  准(zhǔn)確(què)性 ：標準(zhǔn)品線(sī)性回歸與預(yù)期濃度相關係(xì)數R值，大於等於0.9900 。

2.  靈敏度
：zui低檢測濃度小於1.0 pg/mL 。

3.  特異性 ：不與其它可溶(róng)性結構類似物交叉反應(yīng) 。

4.  重復性：板內、板間變異系(xì)數均小於15% 。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期 ：6個月(yuè)

免責聲明

1.   試劑(jì)盒僅供研(yán)究使用(yòng) ，不得用(yòng)於臨床實(shí)驗或人(rén)體實(shí)驗 ，否則所產生的一切(qiè)後果，由實(shí)驗者承擔 ，本公司概(gài)不負責 。

2.   嚴格按照說(shuō)明書操(cāo)作 ，實(shí)驗者違反說(shuō)明書操(cāo)作，後果由實(shí)驗者承擔。