本試劑盒(hé)只能用於科學研究(jiū)，不(bù)得用於醫學診斷

人（Human）紅富鐵jī素（ERFE）ELISA檢測試劑盒(hé)

使用說明書

檢測原理

試劑盒(hé)採用雙kàng體一步夾心(xīn)法酶聯免疫吸(xī)附試驗（ELISA）。往預先包被紅富鐵jī素（ERFE）kàng體的包被微(wēi)孔中，依次加入標本、標準(zhǔn)品(pǐn) 、HRP標記的檢測kàng體 ，經過溫(wēn)育並chè底洗滌 。用底物TMB顯(xiǎn)色 ，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸(suān)的作用下轉化成最(zuì)終的黃色。顏色的深淺和樣品(pǐn)中的紅富鐵jī素（ERFE）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸(xī)光度（OD 值） ，計算樣品(pǐn)濃度 。

樣品(pǐn)收(shōu)集、處理及保(bǎo)存方法

1.  血清：使用不(bù)含熱原和內(nèi)毒素的試管 ，操作過程中避免任何細胞刺(cì)激(jī)，收(shōu)集血液後，3000轉離心(xīn)10分鐘將血清和紅細胞迅速小心(xīn)地(dì)分離。

2.  血漿：EDTA 、檸檬酸(suān)鹽或肝素抗(kàng)凝。3000轉離心(xīn)30分鐘取(qǔ)上清 。

3.  細胞上清液 ：3000轉離心(xīn)10分鐘去除顆粒和聚合物 。

4.  組織勻(yún)漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心(xīn)10分鐘取(qǔ)上清 。

5.  保(bǎo)存 ：如果樣本收(shōu)集後不(bù)及時檢測 ，請按一次用量分裝 ，凍存於-20℃，避免反復凍融，在室溫(wēn)下解凍並確保(bǎo)樣品(pǐn)均勻(yún)地(dì)充分解凍 。

自備物品(pǐn)

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭 ：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL 、200-1000uL

3. 37℃恆溫(wēn)箱

操作注意(yì)事項

1.  試劑盒(hé)保(bǎo)存在2-8℃ ，使用前室溫(wēn)平衡20分鐘。從冰箱取(qǔ)出的濃縮洗滌液會有結晶，這(zhè)屬於正常現象 ，水浴加熱使結晶wán全溶解後再使用。

2.  實(shí)驗中不(bù)用的板(bǎn)條應立即放回自封袋中 ，密封（低溫(wēn)乾燥）保(bǎo)存 。

3.濃度為0的S0號標準(zhǔn)品(pǐn)即可視為陰性對(duì)照或者空白(bái)；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍 ，最(zuì)終結果乘以5才(cái)是樣本實(shí)際濃度 。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間(jiān) 、加液量及順序進(jìn)行溫(wēn)育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻(yún)。

試劑盒(hé)組成

注：標準(zhǔn)品(pǐn)（S0-S5）濃度依次為：0、1.5 、3、6、12、24 ng/ml 

試劑的准(zhǔn)備

 20×洗滌緩衝液的稀釋 ：蒸餾水按1 ：20稀釋 ，即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水 。

洗板(bǎn)方法

1.  手工洗板(bǎn)：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置(zhì)1min後甩盡孔內(nèi)液體，在吸(xī)水紙上拍乾 ，如此洗板(bǎn)5次 。

2.  自動洗板(bǎn)機
：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板(bǎn)5次 。

操作步驟

1.  從室溫(wēn)平衡20min後的鋁箔袋中取(qǔ)出所需(xū)板(bǎn)條 ，剩餘(yú)板(bǎn)條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置(zhì)標準(zhǔn)品(pǐn)孔和樣本孔 。標準(zhǔn)品(pǐn)孔各加不(bù)同濃度的標準(zhǔn)品(pǐn)50μL ；

3.  待測樣本孔先加樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL ；空白(bái)孔不(bù)加 。

4.  除空白(bái)孔外 ，標準(zhǔn)品(pǐn)孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測kàng體100μL，用封板(bǎn)膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恆溫(wēn)箱溫(wēn)育60min。

5.  棄去液體 ，吸(xī)水紙上拍乾 ，每孔加滿洗滌液，靜置(zhì)1min
，甩去洗滌液，吸(xī)水紙上拍乾，如此重復洗板(bǎn)5次（也可用洗板(bǎn)機洗板(bǎn)）。

6.  每孔加入底物A 、B各50μL，37℃避光孵育15min 。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi) ，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷

 繪制標準(zhǔn)曲線：在Excel工作表中 ，以標準(zhǔn)品(pǐn)濃度作橫(héng)坐標 ，對(duì)應OD值作縱坐標，繪制出標準(zhǔn)品(pǐn)線性回歸曲線 ，按曲線方程計算各樣本濃度值 。 

試劑盒(hé)性能

1.  准(zhǔn)確性 ：標準(zhǔn)品(pǐn)線性回歸與預期濃度相關係(xì)數R值，大(dà)於等(děng)於0.9900 。

2.  靈敏度 ：zuì低檢測濃度小於0.1 ng/ml。

3.  特異性 ：不(bù)與其(qí)它可溶性結構類似物交叉反應 。

4.  重復性 ：板(bǎn)內(nèi) 、板(bǎn)間(jiān)變(biàn)異系(xì)數均小於15%。

5.  貯藏 ：2-8℃，避光防潮保(bǎo)存。

6.  有效期 ：6個(gè)月

免責聲(shēng)明

1.   試劑盒(hé)僅供研究(jiū)使用 ，不(bù)得用於臨床實(shí)驗或人體實(shí)驗，否則所產生的一切後果，由實(shí)驗者承擔，本公司概不(bù)負責。

2.   嚴格按照說明書操作，實(shí)驗者違反說明書操作，後果由實(shí)驗者承擔 。