本試劑盒只能用於科(kē)學研究(jiū) ，不(bù)得用於醫學診斷

小鼠（Mouse）脂肪酸結合蛋白(bái)4（FABP4）

ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒採用雙kàng體一步夾心法酶聯免(miǎn)疫吸附試驗（ELISA）。往預先(xiān)包被脂肪酸結合蛋白(bái)4（FABP4）kàng體的包被微孔中(zhōng)，依次加(jiā)入標本 、標準品、HRP標記的檢測kàng體，經(jīng)過溫育並chè底(dǐ)洗滌 。用底(dǐ)物TMB顯色(sè)，TMB在過氧化(huà)物酶的催化(huà)下轉(zhuǎn)化(huà)成(chéng)藍色(sè)，並在酸的作用下轉(zhuǎn)化(huà)成(chéng)最終的黃色(sè) 。顏色(sè)的深淺(qiǎn)和(hé)樣品中(zhōng)的脂肪酸結合蛋白(bái)4（FABP4）呈正相關。用酶標儀(yí)在450nm 波長下測定吸光度（OD 值） ，計(jì)算樣品濃(nóng)度 。

樣品收集(jí)、處(chù)理及保存方法

1.  血清：使用不(bù)含熱原和(hé)內(nèi)毒素的試管，操作過程(chéng)中(zhōng)避免(miǎn)任何(hé)細胞(bāo)刺激 ，收集(jí)血液(yè)後(hòu) ，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和(hé)紅細胞(bāo)迅速小心地分離 。

2.  血漿 ：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝 。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上(shàng)清 。

3.  細胞(bāo)上(shàng)清液(yè) ：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和(hé)聚合物 。

4.  組織勻漿 ：將組織加(jiā)入適(shì)量生(shēng)理鹽水搗碎 。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上(shàng)清。

5.  保存：如果(guǒ)樣本收集(jí)後(hòu)不(bù)及時檢測，請按一次用量分裝 ，凍存於-20℃，避免(miǎn)反復凍融，在室(shì)溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍
。

自備物品

1. 酶標儀(yí)（450nm）

2. 高(gāo)精度加(jiā)樣器及槍頭(tóu) ：0.5-10uL 、2-20uL 、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恆溫箱(xiāng)

操作注意事項

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室(shì)溫平(píng)衡(héng)20分鐘。從冰箱(xiāng)取出的濃(nóng)縮(suō)洗滌液(yè)會有結晶 ，這屬於正常(cháng)現象，水浴加(jiā)熱使結晶wán全溶解後(hòu)再使用 。

2.  實(shí)驗中(zhōng)不(bù)用的板條應立即放回自封袋中(zhōng)，密封（低溫乾燥）保存。

3.  濃(nóng)度為0的S0號標準品即可(kě)視為陰性對照或者空白(bái) ；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍 ，最終結果(guǒ)乘以(yǐ)5才是樣本實(shí)際濃(nóng)度。

4.  嚴格按照說明書中(zhōng)標明的時間 、加(jiā)液(yè)量及順序(xù)進行溫育操作。

5.  所有液(yè)體組分使用前充分搖(yáo)勻。

試劑盒組成(chéng)

注 ：標準品（S0-S5）濃(nóng)度依次為：0 、30
、60 、120 、240 、480 pg/mL

試劑的準備

 20×洗滌緩衝液(yè)的稀釋：蒸餾水按1 ：20稀釋 ，即1份的20×洗滌緩衝液(yè)加(jiā)19份的蒸餾水 。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液(yè)體，每孔加(jiā)滿洗滌液(yè) ，靜(jìng)置(zhì)1min後(hòu)甩盡孔內(nèi)液(yè)體 ，在吸水紙上(shàng)拍乾 ，如此洗板5次。

2.  自動洗板機 ：每孔注入洗液(yè)350μL，浸泡1min ，洗板5次。

操作步驟

1.  從室(shì)溫平(píng)衡(héng)20min後(hòu)的鋁箔袋中(zhōng)取出所需板條 ，剩餘板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置(zhì)標準品孔和(hé)樣本孔，標準品孔各加(jiā)不(bù)同(tóng)濃(nóng)度的標準品50μL ；

3.  樣本孔先(xiān)加(jiā)待測樣本10μL，再加(jiā)樣本稀釋液(yè)40μL；空白(bái)孔不(bù)加(jiā)。

4.  除空白(bái)孔外 ，標準品孔和(hé)樣本孔中(zhōng)每孔加(jiā)入辣根(gēn)過氧化(huà)物酶（HRP）標記的檢測kàng體100μL，用封板膜封住反應孔 ，37℃水浴鍋或恆溫箱(xiāng)溫育60min。

5.  棄去液(yè)體 ，吸水紙上(shàng)拍乾 ，每孔加(jiā)滿洗滌液(yè)，靜(jìng)置(zhì)1min，甩去洗滌液(yè) ，吸水紙上(shàng)拍乾，如此重復洗板5次（也可(kě)用洗板機洗板） 。

6.  每孔加(jiā)入底(dǐ)物A 、B各50μL，37℃避光孵育15min
。

7.  每孔加(jiā)入終止液(yè)50μL ，15min內(nèi) ，在450nm波長處(chù)測定各孔的OD值 。

結果(guǒ)判斷

 繪制標準曲線：在Excel工作表中(zhōng)，以(yǐ)標準品濃(nóng)度作橫坐標，對應OD值作縱坐標 ，繪制出標準品線性回歸曲線 ，按曲線方程(chéng)計(jì)算各樣本濃(nóng)度值。

試劑盒性能

1.  準確性 ：標準品線性回歸與預期濃(nóng)度相關係(xì)數R值，大於等於0.9900
。

2.  靈敏度：zuì低檢測濃(nóng)度小於1.0 pg/mL 。

3.  特異性 ：不(bù)與其它(tā)可(kě)溶性結構類似物交叉反應。

4.  重復性 ：板內(nèi) 、板間變異系(xì)數均小於15%。

5.  貯藏：2-8℃ ，避光防潮保存。

6.  有效(xiào)期：6個月

免(miǎn)責聲(shēng)明

1.   試劑盒僅供研究(jiū)使用 ，不(bù)得用於臨床實(shí)驗或人(rén)體實(shí)驗 ，否則所產生(shēng)的一切後(hòu)果(guǒ)，由實(shí)驗者承擔，本公司(sī)概不(bù)負責 。

2.   嚴格按照說明書操作 ，實(shí)驗者違反說明書操作，後(hòu)果(guǒ)由實(shí)驗者承擔。