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PCR反應詳細基本步驟

更新時間:2024-06-20      瀏覽次數:1114

聚合酶鏈反應技術(Polymerase chain raction ,PCR)是一種在體外(wài)擴增特(tè)定DNA片段的方法,具有特(tè)異 、敏感 、產率高、快速、簡便 、重復性好(hǎo) 、易自動化等突出優點 ,可(kě)用(yòng)很短時間使目的基因或某一片段擴增十萬乃至幾百萬倍 。PCR反應基本步驟 :


1、變性 :根據(fù)DNA高溫變性的原理(lǐ),將反應體系溫度升至變性溫度(高於(yú)模板熔點 ,約95℃) ,使目的DNA雙(shuāng)鏈裂解成PCR模板(單鏈) 。[95℃,30s]


2 、退火(huǒ):將反應體系溫度驟降至退火(huǒ)溫度(低於(yú)引物(wù)熔點約55℃) ,是PCR引物(wù)與PCR模板3’端雜交,稱為退火(huǒ)。[55~65℃ ,30s]


3 、延伸 :將反應體系溫度升至延伸溫度(約72℃) ,DNA聚合酶按照鹼基配對原則在引物(wù)3’端以5’→3’方向催化合成PCR模板新的互補鏈,使目的DNA拷貝數增加1倍 。[72℃,30~60s]


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