本(běn)試劑盒只能用於科學(xué)研究 ，不得用於醫學(xué)診斷(duàn)

牛（Bovine）α-乳清(qīng)蛋白(bái)（α-La）ELISA檢(jiǎn)測試劑盒

使用說明書

檢(jiǎn)測原理

試劑盒採用雙(shuāng)抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預先包(bāo)被α-乳清(qīng)蛋白(bái)（α-La）抗體的包(bāo)被微孔中 ，依次加入標本(běn)、標準品、HRP標記(jì)的檢(jiǎn)測抗體，經過溫育並徹-底(dǐ)洗滌 。用底(dǐ)物TMB顯(xiǎn)色 ，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色 ，並在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃(huáng)色。顏色的深淺和樣(yàng)品中的α-乳清(qīng)蛋白(bái)（α-La）呈正相關。用酶標儀在450nm 波(bō)長下測定吸光(guāng)度(dù)（OD 值） ，計算樣(yàng)品濃度(dù) 。

樣(yàng)品收集 、處理及保(bǎo)存方法

1.  血清(qīng)：使用不含熱原和內毒(dú)素的試管 ，操作過程(chéng)中避(bì)免任何(hé)細胞刺激 ，收集血液後 ，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清(qīng)和紅細胞迅速小(xiǎo)心地分離 。

2.  血漿：EDTA 、檸檬酸鹽或肝素抗凝 。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清(qīng) 。

3.  細胞上清(qīng)液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚(jù)合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清(qīng) 。

5.  保(bǎo)存 ：如果樣(yàng)本(běn)收集後不及時(shí)檢(jiǎn)測 ，請按一次用量分裝(zhuāng) ，凍(dòng)存於-20℃ ，避(bì)免反(fǎn)復凍(dòng)融，在室溫下解(jiě)凍(dòng)並確保(bǎo)樣(yàng)品均(jūn)勻地充分解(jiě)凍(dòng)。

自備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度(dù)加樣(yàng)器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL 、20-200uL 、200-1000uL

3. 37℃恆溫箱

操作注(zhù)意事項(xiàng)

1.  試劑盒保(bǎo)存在2-8℃，使用前(qián)室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶 ，這屬(shǔ)於正常現(xiàn)象，水浴加熱使結晶完-全溶解(jiě)後再使用 。

2.  實驗(yàn)中不用的板條(tiáo)應立即放回(huí)自封袋中，密封（低溫乾(gàn)燥）保(bǎo)存。

3.  濃度(dù)為0的S0號標準品即可視(shì)為陰(yīn)性(xìng)對照或者空白(bái) ；按照說明書操作時(shí)樣(yàng)本(běn)已經稀釋5倍，最終結果乘以5才是樣(yàng)本(běn)實際濃度(dù)。

4.  嚴格(gé)按照說明書中標明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前(qián)充分搖勻。

試劑盒組成

注(zhù) ：標準品（S0-S5）濃度(dù)依次為 ：0 、3
、6 、12、24 、48 ng/ml

試劑的準備

 20×洗滌緩衝液的稀釋：蒸餾水按1 ：20稀釋，即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.  手工洗板 ：甩盡孔內液體 ，每孔加滿洗滌液，靜置(zhì)1min後甩盡孔內液體，在吸水紙(zhǐ)上拍乾(gàn)，如此洗板5次。

2.  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注(zhù)入洗液350μL，浸(jìn)泡1min
，洗板5次 。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需(xū)板條(tiáo)，剩餘板條(tiáo)用自封袋密封放回(huí)4℃ 。

2.  設置(zhì)標準品孔和樣(yàng)本(běn)孔 ，標準品孔各加不同濃度(dù)的標準品50μL ；

3.  樣(yàng)本(běn)孔先加待測樣(yàng)本(běn)10μL，再加樣(yàng)本(běn)稀釋液40μL；空白(bái)孔不加。

4.  除空白(bái)孔外 ，標準品孔和樣(yàng)本(běn)孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記(jì)的檢(jiǎn)測抗體100μL，用封板膜封住反(fǎn)應孔，37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min 。

5.  棄去液體，吸水紙(zhǐ)上拍乾(gàn) ，每孔加滿洗滌液 ，靜置(zhì)1min ，甩去洗滌液
，吸水紙(zhǐ)上拍乾(gàn)，如此重(zhòng)復洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底(dǐ)物A 、B各50μL，37℃避(bì)光(guāng)孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內 ，在450nm波(bō)長處測定各孔的OD值 。

結果判斷(duàn)

 繪制標準曲線 ：在Excel工作表中，以標準品濃度(dù)作橫坐標 ，對應OD值作縱坐標 ，繪制出標準品線性(xìng)回(huí)歸曲線，按曲線方程(chéng)計算各樣(yàng)本(běn)濃度(dù)值 。

試劑盒性(xìng)能

1.  準確性(xìng) ：標準品線性(xìng)回(huí)歸與預期濃度(dù)相關係數(shù)R值，大於等於0.9900。

2.  靈敏度(dù)：最-低檢(jiǎn)測濃度(dù)小(xiǎo)於0.1 ng/ml 。

3.  特異(yì)性(xìng) ：不與其它(tā)可溶性(xìng)結構(gòu)類似物交叉反(fǎn)應 。

4.  重(zhòng)復性(xìng) ：板內、板間變異(yì)系數(shù)均(jūn)小(xiǎo)於15% 。

5.  貯藏：2-8℃，避(bì)光(guāng)防潮保(bǎo)存。

6.  有效期：6個月

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用於臨床實驗(yàn)或人體實驗(yàn)，否則所產生的一切後果，由(yóu)實驗(yàn)者承擔，本(běn)公司(sī)概不負責 。

2.   嚴格(gé)按照說明書操作，實驗(yàn)者違(wéi)反(fǎn)說明書操作，後果由(yóu)實驗(yàn)者承擔 。