ELISA試(shì)劑盒實驗步驟多，新手操(cāo)作者難免出錯。這(zhè)些(xiē)錯誤很多都是(shì)細節不夠造成的(de)
。得到世界科研工作者的(de)認可及(jí)推崇 ，減少這(zhè)種錯誤的(de)方(fāng)法有很多 ，尤其是(shì)國(guó)內生化(huà)領域的(de)長足(zú)發展 。

大鼠ELISA試(shì)劑盒組成結構 ：

1、血(xuè)清(qīng)：操(cāo)作過程中(zhōng)避免任何(hé)細胞刺激 。使用不含熱原和內毒素的(de)試(shì)管。收集血(xuè)液後，1000×g離(lí)心10分鐘(zhōng)將血(xuè)紅(hóng)細胞迅速(sù)小心地分離(lí)。

2、血(xuè)漿 ：EDTA 、檸檬酸(suān)鹽、肝素血(xuè)漿可用於檢測。1000×g離(lí)心30分鐘(zhōng)去(qù)除顆粒 。

3、細胞上清(qīng)液 ：1000×g離(lí)心10分鐘(zhōng)去(qù)除顆粒和聚(jù)合物 。

4 、組織勻漿 ：將組織加入適(shì)量生理鹽水搗碎 。1000×g離(lí)心10分鐘(zhōng) ，取上清(qīng)液 。

5 、保存 ：如果樣(yàng)品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存 ，避免反復(fù)冷凍 。盡可能的(de)不要(yào)使用溶血(xuè)或高血(xuè)脂血(xuè) 。如果血(xuè)清(qīng)中(zhōng)大量顆粒，檢測前先離(lí)心或過濾。不要(yào)在37℃或更(gèng)高的(de)溫度加熱解凍。應在室溫下解凍並確保樣(yàng)品均(jūn)勻地充分解凍。

檢測大鼠ELISA試(shì)劑盒結果必要(yào)條件(jiàn)可分為三個 ：

1、ELISA加樣(yàng)步驟

在ELISA中(zhōng)一般有3次加樣(yàng)步聚(jù) ，即加標本
，加酶結合物，加底物。凍結血(xuè)清(qīng)融解後，蛋白質(zhì)局部濃(nóng)縮 ，分布不均(jūn) ，應充分混勻宜輕緩
，避免氣泡,可上下倒置混和，不要(yào)在混勻器上強(qiáng)烈振(zhèn)蕩 。

制備血(xuè)漿標本需借助(zhù)於抗凝劑，而(ér)血(xuè)清(qīng)標本只要(yào)待血(xuè)清(qīng)天然(rán)凝固 、待其收縮後即可取得。也(yě)可在板孔中(zhōng)加入稀釋液 ，再在其加入血(xuè)清(qīng)標本 ，然(rán)後在微型震蕩器上震蕩1分鐘(zhōng)以(yǐ)保證混和。

一般說(shuō)來(lái)，在5天內測定(dìng)的(de)血(xuè)清(qīng)標本可放置於4℃，超過一周(zhōu)測定(dìng)的(de)需低溫冰存 。可用作ELISA測定(dìng)的(de)標本十分廣(guǎng)泛(fàn)，體液、分泌(mì)物和排(pái)洩物等均(jūn)可作標本以(yǐ)測定(dìng)其中(zhōng)某種抗體或抗原成份
，ELISA試(shì)劑盒中(zhōng)本次試(shì)驗不需用的(de)部分應及(jí)時放回冰箱保留 。

2 、固相(xiàng)載體

加酶結合物應用液和底物用液時可用定(dìng)量多道加液器 ，使加液過程迅速(sù)完成。如有細菌污染，菌體中(zhōng)可能含有內源性HRP，也(yě)會產生假陽性反應。每次加標本應更(gèng)換吸嘴 ，以(yǐ)發生交叉污染 ，也(yě)可用一次性的(de)定(dìng)量塑料管加樣(yàng) 。

良(liáng)好的(de)儀器和準確的(de)操(cāo)縱是(shì)保證ELISA試(shì)劑盒檢測結果正確可靠(kào)的(de)必要(yào)條件(jiàn)。ELISA頂用的(de)蒸餾水或去(qù)離(lí)子水 ，包(bāo)括用於洗滌的(de) ，應為新鮮的(de)和高質(zhì)量的(de) 。有些(xiē)標本可直(zhí)接進行測定(dìng) ，有些(xiē)則需經預(yù)處理 。

3 、標本因素

血(xuè)清(qīng)標本可按常(cháng)規方(fāng)法採(cǎi)集，應留意(yì)避免溶血(xuè) ，紅(hóng)細胞溶解時會開釋出具有過氧化(huà)物酶活性的(de)物質(zhì) ，以(yǐ)HRP為標記的(de)ELISA測定(dìng)中(zhōng) ，溶血(xuè)標本可能會增加非特異性顯(xiǎn)色。

如在冰箱中(zhōng)保留過久 ，其中(zhōng)的(de)可發生聚(jù)合，在間接法ELISA中(zhōng)可使本底加深。本文將敘述板式ELISA各個操(cāo)縱步驟的(de)留意(yì)要(yào)點，國(guó)外(wài)試(shì)劑均(jūn)與特殊儀器配合應用 ，嚴格遵照划定(dìng)操(cāo)縱 ，必能得出正確的(de)結果 。